Обсуждена и утверждена на заседании кафедры.

Ф КГМУ 4/3-06/02

ИП №6 УМС при КазГМА

От 14 июня 2007 г

КАРАГАНДИНСКИЙ Муниципальный Мед Институт

Кафедра молекулярной биологии и мед генетики

Методические советы для семинарских занятий

(TBL)

Тема 30:Исследование структурных нарушений хромосом в соматических клеточках способом кариотипирования.

Специальность: 5В130100– общая медицина

Дисциплина: Молекулярная биология и мед генетика

Курс: 1

Составители:

Кислицкая В.Н.

Татина Е.С.

КАРАГАНДА 2013


Оговорена и утверждена Обсуждена и утверждена на заседании кафедры. на заседании кафедры.

Протокол № _01_ от «_02_» __09__2013

Зав. кафедрой ____________________Б.Ж. Култанов


Тема 30: Исследование структурных нарушений хромосом в соматических клеточках способом кариотипирования.

Форма проведения: практическое (лабораторное занятие).

Микроскопичные способы исследования хромосом человека используются с конца XIX века. Цитогенетические способы созданы для исследования структуры хромосомного набора либо отдельных хромосом. Более всераспространенным способом в цитогенетике Обсуждена и утверждена на заседании кафедры. человека является световая микроскопия. Электрическая и конфокальная лазерная микроскопия применяется в современной цитогенетике только с исследовательскими целями. Во всей медико-генетической практике применяется световая микроскопия (приемущественно в проходящем свете), включая люминесцентную микроскопию.

Объектом цитогенетических наблюдений могут быть делящиеся соматические, мейотические и интерфазные клеточки. Любой из этих объектов имеет Обсуждена и утверждена на заседании кафедры. достоинства и недочеты. Выбор объекта определяется целью исследования.

Большая часть цитогенетических исследовательских работ производится на соматических клеточках, потому остановимся на описании этих способов.

Объект исследования:кровь икостный мозг лабораторных животных.

Ход работы:

Для стимуляции методической активности животным за 2 ч до забоя вводят 2,5 мг/кг колхицина.

Всех животных забивать Обсуждена и утверждена на заседании кафедры. под эфирным наркозом способом неполной декапитации через 24 часа после введения продукта. У животного выделяется бедренная кость, из которой шприцом с маленьким количеством физиологического раствора вымывается костный мозг.

Осадить клеточки центрифугированием, откинуть супернатант и ресуспендировать осадок в 5 мл гипотонического раствора 0,075 М КCI при 370С.

После 10-15 мин инкубации при 370С собрать клеточки Обсуждена и утверждена на заседании кафедры. центрифугированием при 100g в течение 10 мин и откинуть супернатант, ресуспендировать клеточки маленьком объеме (приблизительно 1-2 объёма клеточного осадка) гипотонического раствора KCI.

Медлительно добавить 2 мл свежеприготовленного фиксатора (фиксатор должен охлажден) при неизменном помешивании (пипетировании пастеровской пипеткой, встряхиванием либо при помощи вортекса).

Через 20 мин либо более осадить клеточки центрифугированием, откинуть супернатант и ресуспендировать клеточки Обсуждена и утверждена на заседании кафедры. в 2 мл свежайшего фиксатора. Дать суспензии постоять при комнатной температуре в течение 10-15 мин.

Осадить клеточки центрифугированием при 100g в течение 2 мин, откинуть супернатант и ресуспендировать клеточки в маленьком объёме (приблизительно 10-15 объёмов клеточного осадка) свежайшего фиксатора.

Для изготовления препаратов нанести суспензию по каплям на незапятнанное прохладное (40С) предметное стекло, наклоненное Обсуждена и утверждена на заседании кафедры. под углом 450; немного покачивая стекло, дать суспензии разлиться по поверхности и высушить на воздухе при комнатной температуре.

Исследовать продукт в фазово – контрастном микроскопе. Метафазные пластинки должны быть умеренно и без перекрывания распределены по поверхности стекла. Плотность клеток на стекле можно регулировать, меняя число капель суспензии либо Обсуждена и утверждена на заседании кафедры. изменяя концентрацию клеток в суспензии.

Окрасить продукт краской по Гимза-Романовского в течение 1-15 мин; сполоснуть водопроводной водой и высушить на воздухе.

Приготовленные препараты микроскопируют. Анализу подвергают 100 метафазных клеток каждого животного.

Результаты представляют:

  1. общее число проанализированных клеток;
  2. процентное соотношение из их аберрантных;
  3. диапазон аберраций и процентное соотношение их;
  4. значение X2 статистики соотношения обычных Обсуждена и утверждена на заседании кафедры. и аберрантных метафазных клеток в подопытных и контрольных группах.

Реактивы:колхицин, эфир, физиологический раствор, гипотонический раствор КCI, ацетоорсеин, этанол, уксусная кислота, краситель Гимза-Романовского.

Приборы и оборудование:шприц, пастеровская пипетка, центрифуга, предметное стекло, фазово – контрастный микроскоп, термостат.

Значение:предложенное практическое занятие позволяет освоить способы определения хромосомных абберации т Обсуждена и утверждена на заседании кафедры..е. количественные и высококачественные конфигурации хромосом. Зависимо от цели и способа расцветки определяются числовые аномалии кариотипа, структурные нарушения хромосом, степень мутагенности причин среды.


obshina-pleven-dade-17-yazovira-na-koncesiya-deficit-po-byudzheta-na-obshinite-v-razmer-na-1-mln-lv-predvizhda-proektobyudzhett-za-2013-g.html
obshirnaya-obrazovatelnaya-programma.html
obshivka-vagonkoj-kamennogo-doma.html